ANTIKOAGULAN

I. Dasar Teori

       Antikoagulan adalah zat yang mencegah penggumpalan darah dengan cara mengikat kalsium atau dengan menghambat pembentukan trombin yang diperlukan untuk merubah fibrinogen menjadi fibrin dalam proses pembekuan. Namun tidak semua jenis antikoagulan dapat dipakai karena ada beberapa antikoagulan yang dapat mempengaruhi  bentuk eritrosit atau leukosit yang akan diperiksa morfologinya. Pada pemeriksaan hematologi yang membutuhkan spesimen berupa whole blood dan atau plasma, maka sampel darah harus dikumpulkan dalam sebuah tabung yang berisi antikoagulan sehingga dengan pemberian antikoagulan darah tidak akan beku. Spesimen dan antikoagulan harus dicampur homogen serta segera setelah pengambilan spesimen untuk mencegah pembentukan microclot. Pencampuran yang lembut sangat penting untuk mencegah hemolisis. Jenis antikoagulan yang baik adalah yang tidak merusak komponen-komponen yang terkandung di dalam darah dan harus sesuai dengan jenis pemeriksaan yang diinginkan. Ada berbagai jenis antikoagulan, masing-masing digunakan dalam jenis pemeriksaan tertentu. Seperti EDTA, Heparin, Natrium Sitrat, Oksalat, dan lain-lain.

1. EDTA

      EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid, [CH2N(CH2CO2H)2]2) adalah antikoagulan yang umumnya tersedia dalam bentuk garam sodium (natrium) atau potassium (kalium). EDTA mencegah koagulasi dengan cara mengikat atau mengkhelasi kalsium, sehingga tidak mempengaruhi sel-sel darah.

Ada tiga macam EDTA, yaitu dinatrium EDTA (Na2EDTA), dipotassium EDTA (K2EDTA) dan tripotassium EDTA (K3EDTA). Na2EDTA dan K2EDTA biasanya digunakan dalam bentuk kering, sedangkan K3EDTA biasanya digunakan dalam bentuk cair. Tiap 1 mg EDTA menghindari membekunya 1 mL darah. Umumnya untuk memudahkan pengukuran maka dibuat menjadi larutan 10% atau 4 %.

         Penggunaan disodium EDTA (Na2EDTA) biasanya dengan konsentrasi 1,4 – 2,0 mg/ml darah, dipotassium EDTA (K2EDTA) dengan konsentrasi 1,5 – 2,2 mg/ml darah, dan tripotassium EDTA (K3EDTA) dengan konsentrasi 1,5 - 2.,2 mg/ml darah. Bila jumlah EDTA kurang, darah dapat mengalami koagulasi. Sebaliknya, bila EDTA berlebihan, eritrosit mengalami krenasi, trombosit membesar dan mengalami disintegrasi yaitu trombosit membengkak sehingga tampak adanya trombosit raksasa yang pada akhirnya mengalami fragmentasi membentuk fragmen-fragmen yang masih dalam rentang pengukuran trombosit oleh alat hitung sel otomatis sehingga dapat menyebabkan peningkatan palsu jumlah trombosit.
         Penggunaan EDTA biasanya pada saat darah dimasukkan ke dalam tabung, segera lakukan pencampuran/homogenisasi dengan cara membolak-balikkan tabung dengan lembut sebanyak 6 kali untuk menghindari penggumpalan trombosit dan pembentukan bekuan darah.

2. Heparin

      Heparin merupakan antikoagulan yang normal dalam tubuh, namun di laboratorium heparin jarang digunakan dalam pemeriksaan-pemeriksaan di laboratorium karena mahal harganya. Heparin berdaya seperti antitrombin. Heparin bekerja dengan cara menghentikan pembentukan trombin dari protrombin sehingga menghentikan pembentukan fibrin dari fibrinogen. Heparin tidak mempengaruhi bentuk eritrosit maupun trombosit. Jenis heparin yang paling banyak digunakan adalah Lithium Heparin karena tidak mengganggu analisa beberapa macam ion dalam darah. Heparin tidak bisa digunakan untuk membuat apusan darah karena menyebebabkan dasar yang biru kehitaman bisa dicat dengan cat wright stain. Tiap 1 mg Heparin menjaga membekunya 10 mL darah.

          Pemeriksaan Hematologi yang Menggunakan Antikoagulan Heparin yaitu

a. Penentuan hemoglobin

b. Penentuan hematokrit

c. Penentuan resistensi osmotic

d. Penghitungan sel-sel darah

e. Penentuan golongan darah

f. Transfusi darah

3. Natrium Sitrat

      Natrium Sitrat (Trisodium Citrat) yang digunakan berbentuk larutan 3,2% dan 3,8%. Antikogulan ini mencegah pembekuan dengan cara mengikat ion kalsium. Banyaknya Natrium Sitrat yang digunakan:

a. Larutan Natrium Sitrat 3,2% digunakan untuk pemeriksaan soal-soal proses pembekuan darah (koagulasi) dan agregasi trombosit. Perbandingan volume antikoagulan dengan darah yaitu 1:9.

b. Larutan Natrium Sitrat 3,8% digunakan pemeriksaan Laju Endap Darah dan Eritrosit Sedimen Rate (ESR). Perbandingan volume antikoagulan dengan darah yaitu 1:4.

4. Campuran Ammonium Oksalat dan Kalium Oksalat

        Nama lainnya dalah Balance Oxalat Mixture atau antikoagulan dari Heller dan Paul. Antikoagulan ini mengandung ammonium oxalat dan kalium oxalat dengan perbandingan 3:2. Kalium oxalat menyebebkan eritrosit mengkerut, sedangkan ammonium oxalat menyebabkan eritrosit mengembang. Campuran kedua garam tersebut bertujuan untuk menghindari perubahan volume eritrosit.

           Banyaknya Antikoagulan Double Oxalat yang digunakan:

Double oxalat kering : 2 mg Double oxalat/1 ml darah

Double oxalat cair 2%: 0.1 ml Double oxalat/1 ml darah

II. Tujuan

Untuk mengetahui cara kerja penggunaan antikoagulan EDTA pada pengambilan sampel darah vena.

III. Prinsip Kerja

Darah vena diambil dengan cara melakukan penusukan pada pembuluh darah vena, darah akan masuk pada ujung semprit, dilanjutkan dengan menarik torak/piston sampai volume darah yang dikehendaki.

IV. Alat dan Bahan

1. Alat

a. Semprit

b. Tourniquet

c. Kapas

d. Plester

e. Gunting

f. Botol sampel

g. Pipet tetes

2. Bahan

a. Larutan EDTA

b. Alkohol 70%

V. Cara Kerja

1. Alat-alat yang diperlukan disiapkan di atas meja.

2. Dimasukkan larutan EDTA % ke dalam botol sampel. Misalnya 

3. Diperiksa keadaan pasien, diusahakan pasien tenang begitu pula petugas (Phlebotomis).

4. Ditentukan vena yang akan ditusuk, pada orang gemuk atau untuk vena yang tidak terlihat dibantu dengan menggunakan tourniquet.

5. Diperhatikan dengan seksama daerah vena yang akan ditusuk.

6. Didesinfeksi tempat penusukan dengan Alkohol 70% dan dibiarkan kering.

7. Dipasang tourniquet pada lengan atas (bagian proximal lengan) 6–7 cm dari lipatan tangan.

8. Tegakkan kulit di atas vena dengan jari-jari tangan kiri supaya vena tidak bergerak

9. Dengan lubang jarum menghadap ke atas, kulit ditusuk dengan sudut 45–60º sampai ujung jarum masuk lumen vena yang ditandai dengan berkurangnya tekanan dan masuknya darah ke ujung semprit.

10. Ditarik holder secara perlahan-lahan sampai volume darah yang diinginkan.

11. Dilepas torniquet, kapas diletakkan di atas jarum dan ditekan sedikit dengan jari kiri, lalu jarum ditarik.

12. Pasien diinstruksikan untuk menekan kapas selama 1–2 menit dan setelah itu bekas luka tusukan diberi plester.

13. Jarum ditutup lalu dilepaskan dari semprit

14. Dimasukkan darah ke dalam botol atau tabung penampung melalui dinding secara perlahan.

15. Dicampur segera secara perlahan-lahan dengan arah memutar.

16. Diberi label pada botol sampel.

17. Sampel darah siap digunakan untuk pemeriksaan.

VI. Hasil

Dari praktikum yang telah dilakukan, didapat darah vena sebanyak 2 ml, dan setelah dicampur dengan ml larutan EDTA %, darah tidak meggumpal.

Sebelum pencampuran darah dengan EDTA, dibuat larutan stok EDTA 10% (10 gram dalam 100 ml), kemudian diencerkan menjadi 4% sebanyak 50 ml.

N1.V1   =N2.V2

10%.V1 =4%.50 ml

V1         =20 ml

Dipipet 20 ml larutan EDTA 10% kemudian dimasukkan ke dalam wadah sampai volumenya 50 ml. Untuk mengetahui kandungan EDTA tersebut, dilakukan perhitungan sebagai berikut:

4% = 4 gr dalam 100 ml

      = 4000 mg dalam 100 ml

Untuk 1 mg EDTA 4% setara dengan:

1 mg EDTA = 1 mg/4000 mg x 100 ml

                     = 0,025 ml EDTA 4%

Jadi, untuk 2 ml darah yang diambil diperlukan 2x0,025 ml EDTA 4%=0,05 ml EDTA 4%.

VII. Kesimpulan
Dari praktikum yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa antikoagulan sangat penting dalam pemeriksaan yang menggunakan sampel darah vena karena dapat mencegah terjadinya penggumpalan pada darah yang dapat menghambat pemeriksaan secara mikroskopis. Antikoagulan EDTA sebaiknya disiapkan sebelum pengambilan sampel darah vena dengan perbandingan 1 mg EDTA dengan 1 ml darah.