Pembuatan Media SSA dan NAP

PEMBUATAN MEDIA

SSA DAN NAP

A.   Tujuan

Untuk mengetahui cara pembuatan media NAP dan SSA.

B.   Alat dan Reagensia

1.      Alat

a.       Neraca

b.      Labu Erlenmeyer

c.       Batang pengaduk

d.      Kompor

e.       Kertas coklat

f.       Spatula

g.      Autoklaf

h.      Bunsen/lampu spiritus

i.        Korek api

j.        Cawan petri

k.      Kapas

l.        Lap/tissue

m.    Handscoon

n.      Masker

2.      Reagensia

a.       Aquadest

b.      NAP (Nutrient Agar Protein)

c.       SSA (Salmonela Shigella Agar)

C.   Cara Kerja

1.      Sterilisasi alat

a.       Periksa kondisi alat dan buang sisa air yang ada di autoklaf, ganti dengan air yang baru hingga tanda batas.

b.      Bungkus alat-alat gelas yang akan digunakan untuk pembuatan media dengan kertas coklat.

c.       Masukkan semua alat ke dalam keranjang, kemudian masukkan ke dalam autoklaf.

d.      Tutup autoklaf, kemudian atur waktu dan suhu, yaitu ±30 menit dengan suhu 121°C dan tekanan 15psi.

e.       Tekan tombol start.

f.       Tunggu sampai alarm berbunyi dan diamkan beberapa saat, lalu tekan tombol off.

g.      Biarkan sampai tanda indicator tekanan menunjukkan angka nol.

h.      Keluarkan keranjang dari autoklaf.

2.      Pembuatan media

Pembuatan NAP dan SSA dilakukan dengan cara yang sama, yaitu:

a.       Timbang :

b.      Masukkan serbuk NAP ke dalam labu Erlenmeyer 500 ml yang telah berisi aquadest setengahnya.

c.       Aduk sampai homogen.

d.      Lakukan pengenceran dengan menambahkan aquadest sampai batas tanda 250 ml.

e.       Panaskan di atas kompor sampai semua serbuk larut sempurna dan tidak menggumpal.

f.       Tutup mulut Erlenmeyer dengan kapas lalu dibungkus dengan kertas coklat.

g.      Lakukan sterilisasi media seperti sterilisasi alat.

h.       Setelah sterilisasi selesai, biarkan media menjadi hangat (±50°C).

i.        Panaskan mulut Erlenmeyer kemudian lakukan penuangan pada cawan petri sampai 1/3 tinggi cawan. Penutup cawan petri harus dibuka sesedikit mungkin, dan dilakukan di dekat api.

j.        Panaskan kembali mulut Erlenmeyer, kemudian lakukan penuangan sampai media NAP habis sebelum menggumpal.

k.      Simpan media yang telah dibuat di dalam kulkas jika tidak digunakan langsung.

l.        Jika media akan digunakan, lakukan penanaman media dengan cara mengambil sampel bahan, seperti tanah menggunakan ose, lalu goreskan pada media NAP secara 4 kuadran.

m.    Kuadran pertama goresan banyak, kuadran kedua semakin tipis, dan begitu seterusnya sampai kuadran ke empat.

n.      Setiap pergantian kuadran, ose harus dipijarkan dan ditunggu sampai dingin, dan pembuatan kuadran berikutnya dimulai dari kuadran sebelumnya.

o.      Penanaman harus dilakukan di dekat api dengan membuka penutup cawan petri sesedikit mungkin.

p.      Simpan pada inkubator selama 1 hari.

D.   Perhitungan

1.      NAP (Nutrient Agar Protein)

NAP dibuat dengan takaran 60 gr/l. Untuk membuat 250 ml media

·         Berat wadah          : 1,7 gr

·         Berat zat                : 15 gr

·         Berat wadah + zat : 16,7 gr

2.      SSA (Salmonela Shigella Agar)

SSA dibuat dengan takaran 20 gr/l. Untuk membuat 250 ml media

·         Berat wadah          : 1,7 gr

·         Berat zat                : 5 gr

·         Berat wadah + zat : 6,7 gr